残留宿主细胞 DNA 检测

目前用于重组 DNA 产品、单克隆抗体和一些疫苗的许多细胞基质是异常的，因为这些细胞或者致瘤，或者实际上来自肿瘤。在从这些细胞培养系统制造产品的过程中，可能会发生细胞裂解。因此，可能含有致癌基因的宿主细胞 DNA 也许会存在于产品中，从而导致受体发生致瘤事件。生产方案通常包括去除核酸的纯化程序；然而，仍然需要验证中间和最终产品样本中存在的残留宿主 DNA 数量。

残留 DNA 定量方法

Charles River 使用高度灵敏的方法来检测和量化微量的宿主细胞 DNA 残留。从总 DNA 的非特异性检测到物种特异性靶序列的检测，我们提供以下方法：

• 阈值测定法 – 使用对单链 DNA 具有高亲和力的 DNA 结合蛋白对总 DNA 进行非特异性定量
• qPCR 测定法 – 一种基于定量 PCR 的方法，用于检测特定来源的特定 DNA；靶向特定基因序列进行扩增

样本制备

无论使用哪种方法测定残留 DNA，测定的成功在很大程度上取决于对初始样本的处理。每种检测对残留物（例如有机溶剂、去污剂、高盐浓度、乙醇或残留蛋白质）的敏感性各不相同，因此必须考虑特定基质的预处理。为确保测定和样本基质的适用性，应考虑以下预处理：有机提取、蛋白酶 K 处理、磁珠、无酚 Wako 提取或其他基于柱层析的核酸结合方法，以及加入共沉淀剂用乙醇沉淀。需要注意的是，产品纯化过程的变化会影响样本基质，进而可能影响测定方法。

提交样本

方法学验证

根据国际协调会议 (ICH) 指导方针，所有定量分析都需要对精密度、准确度、检测和定量限、线性和特异性进行验证。根据 ICH 指导方针，我们使用标准矩阵验证 DNA 检测方法，也会执行产品在后期临床阶段所需的样本特异性方法验证。