为了证明表达载体的基因序列在整个生产生命周期内是稳定的，以确保产品和生产过程的质量和一致性，需要进行基因稳定性检测。
新一代测序 (NGS) 现在被公认为全基因组测序最强大、最可靠的工具之一。将 NGS 用于细胞系检定使您可以运行一项研究，而不必执行多项检测来获得相同的结果。
网络研讨会：使用 NGS 表征细胞系
了解如何使用新一代测序技术来检定您的细胞系以及验证克隆性和鉴别。
根据 ICH Q5B 指导方针，监管机构要求必须在两个时间点（即MCB和 EOPC 水平）分析细胞基质，以显示其基因稳定性。必须应用方法来确认表达载体的编码序列或相应的 RNA 转录产物。必须确定转基因的拷贝数，并且必须通过限制性内切酶图谱证明其完整性和整合模式。
基因检定和稳定性检测的策略因生产系统和项目阶段而异。我们的监管专家可以为您的计划提供指导，以满足监管要求。
Charles River 应用以下方法来确定重组生产细胞系的基因稳定性并检定质粒产品：
Charles River 与基因组学专家 PathoQuest 合作，提供下一代测序 (NGS) 服务，该服务也可用于基因稳定性检测。我们的合作伙伴关系可以通过提供快速而全面的测试来加速您的药物开发。
在重组生产细胞中表达的转基因会发生突变，这可能会影响产品质量和过程的一致性；因此，在生产细胞的整个生命周期内证明表达载体的稳定性是一项监管要求。
ICH 主题 Q 5 B，生物技术产品的质量：Analysis of the Expression Construct in Cell Lines Used for Production of rDNA Derived Protein Products, European Medicines Agency, 1996
对重组 DNA 技术生产的新药和生物制品生产和检测注意事项的补充：Nucleic Acid Characterization and Genetic Stability, Food and Drug Administration, Center for Biologics Evaluation and Research Food and Drug Administration, 1992
限制性内切酶分析方法的目的是，确认与整合的表达载体相关的限制性内切酶酶切图谱没有发生变化。从样本细胞中提取基因组 DNA，然后用一组选定的合适限制性内切酶进行片段化。
使用琼脂糖凝胶电泳分离得到的 DNA 片段，然后使用标记的序列特异性探针对酶切后基因组 DNA 进行 Southern 印迹。确定所得片段的长度并与理论值进行比较。
